流式细胞术培训

第 1 部分：了解您的流式细胞仪

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欢迎来到我们的流式细胞术系列培训。我们首先介绍一些基本知识，比如了解您的细胞仪，接着介绍一些细节，最后介绍如何充分利用这项强大的技术。

在流式细胞术培训的第 1 部分中，我们将带您了解流式细胞仪背后的核心概念，然后再转到讨论荧光基团以及如何根据您的需要选择正确的荧光基团。

第 1 部分 概述

1.1 流式细胞术简介
1.2 流式细胞仪
1.3 了解荧光基团
1.4 选择合适的荧光基团

1.1 流式细胞术简介

流式细胞术是一项广为使用、基于激光的技术，用于检测细胞或颗粒特性。流式细胞术广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达，表征和定义异质细胞群中的不同细胞类型，评估分离亚群的纯度以及分析细胞大小和体积。该技术可同时对单个细胞进行多参数分析。

流式细胞术的常用方法有两种：

• 免疫表型 —— 通过是否存在特征性内源性细胞标志物来识别细胞群

• 活细胞的荧光激活细胞分选术（FACS）—— 根据荧光标记，将一个细胞群分为多个亚群

以下视频介绍了流式细胞术的各种应用，并带您了解流式细胞术分析的关键要素，例如前向和侧向散射、设门策略及补偿。

1.2 流式细胞仪

上面的视频已经介绍过，流式细胞仪利用散射光和发射荧光组合来产生数据。通过流式细胞仪运行样本（通常是细胞悬液）时，鞘液以流体动力学方式促使细胞悬液通过小喷嘴，并以单细胞方式通过激光（图 1）。随后，通过检测器收集前向和侧向散射光（分别为 FSC 和 SSC），以及染色细胞发射的荧光。

图 1. 流式细胞仪概述。

FSC 与细胞大小有关，SSC 与细胞的粒度成正比，您可以仅根据细胞大小和粒度来区分细胞群。

观看下面的视频，了解不同流式细胞仪系统的重要性及其不同功能。

1.3 了解荧光基团

荧光基团（或荧光染料）吸收并发射一定波长范围内的光，并且通常作为检测试剂与抗体偶联。荧光染料吸收光和发射光的波长分别构成荧光染料的激发光谱和发射光谱（或简称荧光光谱）。

图 2. 上：荧光基团的激发和发射基础原理。1）荧光基团吸收特定波长的光能。2）光吸收诱导荧光基团的电子激发。3）电子恢复基态后，荧光基团以更长的波长重新发射吸收的光能。下：FITC 的激发和发射光谱。

了解关于荧光基团的更多信息，包括串联染料。

1.4 选择合适的荧光基团

首先，为实验选择合适的荧光染料可能具有一定的挑战性，特别是在计划使用两种或多种荧光染料进行多色实验时。我们开发了一种新的选择工具来帮助您完成这个任务。

对于多色实验，您必须了解荧光染料之间的光谱重叠，以便最大限度地减少荧光溢出等问题。进行多色实验时，直接偶联抗体是最佳选择。

下面是一张荧光染料图表，可让您快速识别荧光染料中任何可能重叠的光谱。

下载完整版的荧光染料图表。

在光谱被覆盖的情况下，您需要考虑荧光基团相对于抗原表达水平的亮度。总的来说：

• 如果抗原表达水平较低或不明或细胞数量较少，应使用较明亮的荧光染料，例如 PE

• 如果抗原表达水平较高或细胞数量较多，可以使用较暗的荧光染料，例如 PerCP

观看下面的短视频，了解有关合适荧光基团选择的更多信息。

小结

这就是第 1 部分的内容。现在，您应该很好地了解了：

• 流式细胞仪的工作原理
• 荧光基团及其不同的光谱
• 如何为您的实验选择合适的荧光基团

在第 2 部分，我们将介绍样本制备、合适的对照及流式细胞术的染色方案。

现在开始学习第 2 部分吧！